实验课程体系

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普通生物化学与分子生物学实验

 

实验一 实验准备
实验内容
实验注意事项、常规仪器使用介绍（离心机的正确使用，移液枪的使用视频）清洗器皿
 
实验二  蛋白质的定量测定（分光光度计的使用视频）
教学目标
1 掌握紫外吸收法、Folin－酚试剂法（Lowry法）和考马斯亮蓝染色法（Bradford法）测定蛋白质含量的原理和方法
2 掌握分光光度计的原理和使用方法
实验内容
1紫外吸收法、Folin－酚试剂法（Lowry法）和考马斯亮蓝染色法（Bradford法）测定蛋白质含量；
2 原始数据的分析处理，蛋白标准曲线的制作
学生实验结果：图2-1，2-2，2-3
 
实验三  糖的定量测定
教学目标
1 学习蒽酮比色法测定糖含量的原理
2 掌握蒽酮比色法测定糖含量的方法
实验内容
1 蒽酮比色法测定糖含量
2原始数据的分析处理，糖标准曲线的制作
学生实验结果：图3
 
实验四  葡聚糖凝胶柱层析 （ACTA 层析柱的使用，装柱视频）
教学目标
1 学习凝胶层析法的基本原理
2掌握葡聚糖凝胶（Sephadex）柱层析的操作技术
实验内容
1层析柱的装填
2层析柱的平衡，蛋白样品的上样及洗脱
3 Akata层析系统的操作
学生实验结果：图4
 
实验五 植物叶片过氧化物同工酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 （电泳胶的制备， 电泳，取胶视频）
教学目标
1了解聚丙烯酰胺凝胶聚合和电泳分离原理。
2 掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳的操作技术。
3 了解同工酶研究在理论和实践中的重要意义。
实验内容
1制胶架装配
2分离胶制备 7.5％
3浓缩胶制备 4%
4制备样品（过氧化物酶的提取）
5加样
6电泳
7染色
8实验结果分析，计算各同工酶的相对迁移率。
 
学生实验结果：图5-1，图5-2

实验六 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS－PAGE）测定蛋白质分子量

教学目标
1掌握SDS－PAGE的基本原理。
2掌握应用SDS－PAGE法测定蛋白质分子量的操作技术。
3 掌握考马斯亮蓝染色技术。
实验内容
1 制胶架装配及分离胶12.5％和浓缩胶4%的制备 
2样品制备及变性处理
3加样、电泳
4考马斯亮兰染色及脱色
5实验结果分析：电泳迁移率的计算，标准曲线的制作以及待测蛋白质分子量的计算
学生实验结果：图6-1，图6-2，图6-3

 

实验七 酶联免疫吸附法（ELISA）测定抗体效价 
教学目标
1学习酶联免疫吸附测定的基本原理。
2掌握酶联免疫吸附测定技术，抗体的效价测定及酶联免疫测定仪的使用。 
实验内容
1 包被特异性抗原
2 无关蛋白封闭及洗涤
3 加待测血清(内含抗体)、阴性血清(无抗体)及稀释液(PBS/Tween)
4 加酶标抗体（AP-抗体）
5 显色及终止反应
6 酶联免疫测定仪检测
学生实验结果  图7

实验八 质粒DNA的提取、酶切与鉴定 

教学目标
1. 掌握碱变性法分离及纯化大肠杆菌质粒DNA的实验原理和操作方法。
2. 理解限制性内切酶作为工具酶的分子学意义以及具体实验操作。
实验内容
1. 大肠杆菌质粒DNA的分离及纯化（碱变性法）：培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细菌;分离和纯化质粒DNA。
2. 质粒DNA的双酶切实验。
学生实验结果
图8-1 质粒纯化琼脂糖凝胶电泳图，

 

图8-2 质粒双酶切琼脂糖凝胶电泳图

实验九PCR基因扩增、电泳鉴定 
教学目标
1掌握PCR，DNA扩增技术的基本原理。
2了解影响PCR反应的因素，能够设计PCR引物及PCR反应步骤。
3 熟悉相关操作及PCR仪的使用。 
4掌握琼脂糖凝胶电泳实验
实验内容
1 GI 引物设计
2 PCR条件设定及PCR操作
3 琼脂糖凝胶的制备及电泳
4 观察、拍照并分析
学生实验结果
图9 质粒纯化和GI基因PCR琼脂糖凝胶电泳图

 

实验十 酸性磷酸酯酶动力学性质分析 
教学目标
1 掌握酶活性测定的一般原则，对照反应管的正确设置，系统及操作误差的控制等
2 了解酶的性质鉴定操作中关键因素的把握，条件优化，数据处理的原则
实验内容
1 反应进程曲线及初速度测定
2 米氏常数和最大反应速度的测定
3 抑制剂抑制类型的判断
实验报告：图4-1， 4-2， 4-3， 4-4，4-5